高中生物實驗：DNA的粗提取與鑒定實驗

一、不同試劑用途及原理比較

二、方法步驟比較

三、DNA的粗提取和鑒定實驗中應(yīng)注意的問題

1.盛放雞血細胞液的容器，最好是塑料容器。因為雞血細胞破碎后釋放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，細胞內(nèi)DNA的含量比較少，如果被玻璃窖吸附卻一部分，提取的DNA就會更少。因此，實驗過程中最好使用塑料的燒杯和試管，這樣可以減少提取過程中DNA的損失。

2.獲取較純凈的DNA的關(guān)鍵步驟。

⑴充分?jǐn)嚢桦u血細胞液。DNA存在于雞血細胞的細胞核中。將雞血細胞液與蒸餾水混合后，必須用玻璃棒沿一個方向快速攪拌，使雞血細胞加速破裂，并釋放出DNA。

⑵沉淀DNA時必須用冷酒精。實驗前必須準(zhǔn)備好大量的體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精，并在冰箱中至少存放24h。

⑶正確攪拌含有懸浮物的溶液。實驗步驟3、5、7都需要用玻璃棒攪拌。在進行步驟3、5時，玻璃棒不要直接接觸燒杯底部，而且攪拌要輕緩，以便獲得較完整的DNA分子。進行步驟7時，要將玻璃棒插入燒杯中溶液的中間，用手緩慢轉(zhuǎn)動5min～10min。

3.本實驗中鑒定DNA的方法為二苯胺法。如果在沒有二苯胺的情況下也可以用以下幾種方法。

⑴配制染色劑。用蒸餾水配制0.05%的溴化乙錠(EB)溶液。

⑵將玻璃棒上纏繞的白色絮狀物抹于蠟紙上，再滴1滴EB溶液染色。

⑶將蠟紙放在紫外燈(260nm)下照射(暗室中)，可見橙紅色的熒光(DNA的紫外吸收高峰在260nm處)。

4.典例解析

1.下列關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”的實驗原理中，說法錯誤的是

A.DNA在氯化鈉溶液中的溶解度隨溶液濃度的變化而改變

B.利用DNA不溶于酒精的性質(zhì)，可除去細胞中溶于酒精的物質(zhì)而得到較純的DNA

C.DNA是大分子有機物，不溶于水而溶于某些有機溶劑

D.DNA溶液中加入二苯胺試劑經(jīng)沸水浴后會出現(xiàn)藍色反應(yīng)

解析：該實驗依據(jù)的原理是A、B、D，DNA不溶于酒精(屬有機溶劑)，C說法錯誤。

答案：C

2.下列關(guān)于實驗操作的說法中，有誤的是( )

A.該實驗中有兩次加入蒸餾水，均是為了析出DNA

B.該實驗學(xué)生操作中多次用到攪拌，除最后一步未強調(diào)方向外，其余均要求單向攪拌

C.該實驗中有3次過濾，過濾時使用紗布層數(shù)與需用濾液或黏稠物有關(guān)

D.實驗三次加入NaCl溶液，無論濃度是2mol/L，還是0.015mol/L，均是為了溶解DNA

解析：對照比較表可知，除A說法有誤外，其余各項均正確。兩次加蒸餾水，第一次是為了使細胞吸水破裂釋放出核物質(zhì)(DNA)，第二次是為了降低NaCl溶液的濃度從而析出DNA。

答案：A

3.填寫本實驗操作過程中所用試劑。

⑴提取雞血細胞中核物質(zhì)： ;

⑵溶解核內(nèi)DNA： ;

⑶析出溶液中的DNA： ;

⑷DNA粘稠物的再溶解： ;

⑸提取雜質(zhì)較少的DNA白色乳狀絲狀物： ;

⑹鑒定DNA是否存在可用試劑： 。

解析： ⑹鑒定DNA是否存在常用：二苯胺試劑沸水浴為藍色反應(yīng);也可選用甲基綠試劑，其顏色反應(yīng)為藍綠色。(其它略)

答案：⑴蒸餾水 ⑵2mol/L NaCl溶液 ⑶蒸餾水 ⑷2mol/L NaCl溶液 ⑸冷卻的體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精 ⑹二苯胺試劑或甲基綠試劑

本文來自：逍遙右腦記憶 http://www.simonabridal.com/gaozhong/151008.html

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